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    研域解析ELISA中的“45加樣”

    發(fā)布時(shí)間: 2019-03-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1381次

    在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標(biāo)本,加酶結(jié)合物,加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。

     

    加標(biāo)本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標(biāo)本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液過(guò)程迅速完成。

     

    那么在ELISA中除了包被外,一般需進(jìn)行45加樣。其中“45加樣”是什么意思?這里的45加樣,應(yīng)當(dāng)為45度加樣,即加樣槍的吸頭所在的直線應(yīng)當(dāng)與板條所在的直線呈45度角。

     

    正確的加樣方法應(yīng)為45度,吸頭貼著孔壁加入,應(yīng)注意:

    (1)角度太小,會(huì)使液體殘留在孔壁上,導(dǎo)致加樣不準(zhǔn)確!

    (2)吸頭應(yīng)當(dāng)貼著管壁和液面的交界處!      

     

    在ELISA中加樣還要注意如下問(wèn)題:

    1. 吸取樣品時(shí),加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體;加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體,這樣會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,加樣不準(zhǔn)確!

    2. 不要將吸頭伸入孔中,一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,另一方面可能會(huì)將孔中的液體吹起來(lái),加樣不準(zhǔn)確!

           

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